大腸菌の形質転換(Transformation)
□ ゲル切り出しの対象とするサンプル 10μlを1%ゲルを用いて電気泳動する。
□ UV照射下でゲルを速やかに切り出す(ゲル切り出し用のプレートを使用すること)。その際目的とする部分以外のゲルができるだけ含まれないようにする。
□ 切り出したゲルをビュンビュンカラムに入れ、15000rpmで5分間遠心(ビュンビュンカラムは使用前に100μlの水を入れ15000rpmで3分間遠心して洗っておくこと)。
□ DNA solution 2μlに、Salt solution 0.5μl、ベクター0.25μlを加えて室温で5分以上置く(Ligation反応)。
□ 氷上に移し、大腸菌(注意:氷上にて溶かすこと!)を50μl加え、そのまま氷上に10〜20分間置く。
□ 42℃, 1分間のヒートショックをあたえる。その後、2分間氷上にて冷やす(重要!)。
□ SOCを50μl加える。
□ 37℃で30分間インキュベート。
□ LB ampプレートに菌を播く(densityをつけてまくこと)。