Boiling Preparation
Materials
STE Buffer 8% sucrose
50 mM EDTA
50 mM Tris-HCl pH 8.0
STET Buffer 8% sucrose
50 mM EDTA
50 mM Tris-HCl pH 8.0
10% Triton-X100 (W/V)
Methods
1. Transfer the overnight culture into 1.5 ml ependorf tubes and they are pelleted down
by centrifugation at max speed for 5 minutes.
2. Freeze & thaw
3. 100μl of STE with lysozyme (10mg/10 ml), 5 min at 37°C
4. 100μl of STET, mix
5. Boil for 1 min
6. Centrifuge at Max for 30 min at RT
7. Remove the pellets by toothpicks
8. Add 200μl of 2-propanol.
10. Centrifuge at Max for 10 min
10. Aspirat sup and wash once with 500 μl of 80%EtOH
11. Dry up
12. Dissolve in 100μl of EB with RNase Mix (1/100 vol)
注意
たとえば18本のミニプレを行うなら19本用のSTEを用意し、それに必要量のリゾチームを加え溶かす。それぞれ100マイクロリットルずつ分注し、トミーのガラガラでよくサスペンドすること。ペレットダウンした菌体はサスペンドしにくいのでトミーのガラガラで行うこと。