Isolation of Total RNA by the Modified AGPC Method
Materials
G. Solution: Guanidine Thiocyaneate 250 g
10% SDSa 26.4 ml
1M Sodium citrate 13.2 ml
DW 296.4 ml
D. Sol add 0.36 ml 2-ME /50 ml to G. Sol.
2M Sodium Acetate pH. 4.0
Water saturated phenol；通常のTris飽和のphenolを使ってはいけない．
Chloroform
Methods
□ tissue (1 g)
□ homogenize in 10 ml D. sol. (with antiform A) add 1 ml 2M sodium acetate
□ add 10 ml phenol and mix
□ add 2.5 ml of chloroform
□ centrifuge at 9,000rpm for 20 min.
□ collect sup. and add equal vol. of isopropanol, 30 min at -20｡C
□ centrifuge at 4000 rpm for 20 min.
□ wash 80 %
□ dissolve in D. sol.
注意事項
サンプル量に応じてスケールを変えること．
サンプルが多数ある場合はチューブ（エッペン、１５ml, 50mlのコニカルチューブ）にサンプルを入れ氷上でインキュベートし、サンプルの重量を量る。１本ずつD solを加え即座にホモジナイズを行うこと。まとめてD solを加えホモジナイズを行うことは厳禁である。10倍量のD sol ,等量のフェノールを加えるので、0.5グラム程度は15ml, 2.5グラムまでは５０mlのチューブを使うこと。
OD測定；ブランクはDW199
micro
lに対してD solを1
micro
l. サンプルはDW199
micro
lに対してサンプル溶液を1
micro
lとして測定．D solは260nm以下での吸光度が高いことをブランクをDWにして確認すること．
4 micro-gram/egg
African clawed frog, Xenopus laevis. Its eggs are large (~1.3 mm), harbor very high concentration of RNA (~4 μg), and contain copious amounts of proteins (~130 µg), of which ~13 µg are proteins other than yolk proteins7.
https://www.nature.com/articles/s41598-018-26592-1
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